Производи

Начин на који се ефекти истовремених мутација комбинују да би променили ензимску активност није лако предвидљив јер ови ефекти нису увек адитивни на линеаран начин.Дакле, карактеризација ефеката истовремених мутација аминокиселинских остатака који везују супстрат може дати значајан допринос разумевању специфичности супстрата ензима.У бета-гликозидази из Сподоптера фругиперда (Сфбетагли), оба остатка К39 и Е451 ступају у интеракцију са супстратом и то је неопходно за дефинисање специфичности супстрата.Двоструки мутанти Сфбетагли (А451Е39, С451Е39 и С451Н39) припремљени су мутагенезом усмереном на место, експримирани у бактеријама и пречишћени афинитетном хроматографијом.Ови ензими су окарактерисани коришћењем п-нитрофенил бета-галактозида и п-нитрофенил бета-фукозида као супстрата.Однос к цат/Км за појединачне и двоструке мутанте Сфбетагли који садрже мутације усмерене на место на позицијама К39 и Е451 је коришћен да се покаже да ефекат на слободну енергију ЕСдоубле бодежа (комплекса ензимског прелазног стања) двоструких мутација (Гдоубле даггерки) није збир ефеката који су резултат појединачних мутација (Гдоубле даггерк и Гдоубле даггери).Ова разлика у Гдоубле бодежу указује на то да се ефекти појединачних мутација делимично преклапају.Дакле, овај уобичајени ефекат се рачуна само једном у Гдоубле даггерки.Кристалографски подаци о бета-гликозидазама откривају присуство бидентатне водоничне везе која укључује остатке К39 и Е451 и исту хидроксилну групу супстрата.Према томе, и термодинамички и кристалографски подаци сугеришу да остаци К39 и Е451 врше узајамни утицај на њихове интеракције са супстратом.