Производи

Оксидативно оштећење ДНК база обично резултира стварањем оксидованих пурина, посебно 7,8-дихидро-8-оксогуанина (8-окоГ) и 7,8-дихидро-8-оксоаденина (8-оксоА), при чему је први добро позната мутагена лезија.Пошто је 8-окоГ лако подложан даљој оксидацији у поређењу са нормалним базама, ин витро је испитивано уметање базе током синтезе ДНК насупрот оксидованом облику 8-окоГ.Синтетички шаблон који садржи једну 8-окоГ лезију је прво третиран различитим оксидантима са једним електроном или под условима синглетног кисеоника, а затим је подвргнут продужетку прајмера катализованим Кленововим фрагментом егзо- (Кф егзо-), ДНК полимеразом алфа тимуса телета (пол алфа). ) или хумана ДНК полимераза бета (пол бета).У складу са претходним извештајима, дАМП и дЦМП су уметнути селективно насупрот 8-окоГ са све три ДНК полимеразе.Занимљиво је да је нађено да оксидација 8-окоГ индукује дАМП и дГМП инсерцију наспрам лезије помоћу Кф егзо- са пролазном инхибицијом екстензије прајмера која се јавља на месту модификоване базе.Штавише, лезија представља блок током синтезе ДНК помоћу пол алфа и пол бета.Експерименти са 8-оксоА-модификованим шаблонским олигонуклеотидом показују да и 8-оксоА и оксидовани облик 8-оксоА директно убацују дТМП помоћу Кф егзо-.Масовна спектрометријска анализа олигонуклеотида који садрже 8-окоГ пре и после оксидације са ИрЦл62-су конзистентна са оксидацијом примарно 8-окоГ места, што резултира формирањем гванидинохидантоинског дела као главног производа.Нису добијени докази за формирање абазичних места.Ови резултати показују да оксидовани облик 8-оксоГ, вероватно гванидинохидантоин, може да усмери погрешно читање и погрешно убацивање дНТП-а током синтезе ДНК.Ако би се такав процес догодио ин виво, то би представљало тачкасту мутагену лезију која води до Г-->Т и Г-->Ц трансверзија.Међутим, одговарајући оксидовани облик 8-оксоА првенствено показује исправну инсерцију Т током синтезе ДНК са Кф егзо-.