Производи

Еукариотске ћелије садрже деликатну равнотежу малих количина четири деоксирибонуклеозид трифосфата (дНТП), довољне само за неколико минута репликације ДНК.И недостатак и вишак једног дНТП-а могу довести до повећане стопе мутације, неисправне поправке ДНК или исцрпљивања митохондријалне ДНК.дНТП се обично квантификује ензимским тестом у коме је уградња радиоактивног дАТП (или радиоактивног дТТП у тесту за дАТП) у специфичне синтетичке олигонуклеотиде помоћу ДНК полимеразе пропорционална концентрацији непознатог дНТП.Открили смо да обично коришћена Кленов ДНК полимераза може да замени одговарајући рибонуклеотид за непознати дНТП што у неким случајевима доводи до великог прецењивања дНТП-а.Сада описујемо услове анализе за сваки дНТП који избегавају инкорпорацију рибонуклеотида.За дТТП и дАТП тестове довољно је да се минимизирају концентрације Кленов ензима и обележеног дАТП (или дТТП);за дЦТП и дГТП морали смо да заменимо Кленов ензим или Так ДНК полимеразом или термосеквеназом.Предлажемо да је у неким ранијим извештајима инкорпорација рибонуклеотида можда изазвала превисоке вредности за дГТП и дЦТП.