Производи

Анализа догађаја фосфорилације широм протеома је и даље велики аналитички изазов због огромне сложености мрежа фосфорилације протеина.У овом раду процењујемо комплементарност Лис-Н, Лис-Ц и трипсина у погледу њихове способности да допринесу глобалној анализи фосфопротеома.Рафинисана верзија јаке катјонске измене ниског пХ коришћена је за ефикасно одвајање Н-терминално ацетилираних, фосфорилованих и немодификованих пептида.Укупно 5036 нередундантних фосфопептида може бити идентификовано са стопом лажног откривања од <1% од 1 мг протеина коришћењем комбинације три ензима.Наши подаци су открили да је преклапање између скупова фосфопептидних података генерисаних различитим протеазама било маргинално, док је преклапање између два слично генерисана скупа триптичких података било најмање 4 пута веће.На овај начин, паралелна употреба Лис-Н и трипсина омогућила је повећање броја детектованих фосфопептида за 72% у поређењу са д самим трипсином, док је експеримент репликације трипсина довео само до повећања од 25%.Дакле, када смо се фокусирали искључиво на податке о трипсину и Лис-Н, идентификовали смо 4671 нередундантни фосфопептид.Даља анализа откривених места показала је да су скупови података о Лис-Н и трипсину обогаћени значајно различитим мотивима фосфорилације, што даље доказује да су мултипротеазни приступи веома вредни у анализама фосфопротеома.