Производи

Патогени молекуларни путеви код циротичних обољења јетре као што су вирус хепатитиса Ц (ХЦВ), аутоимуни хепатитис (АИХ) и примарна билијарна цироза (ПБЦ) су слабо окарактерисани.Диференцијално изражени гени су често важни у патогенези болести.Субтрактивна хибридизација супресије (ССХ) је приступ који обухвата цео геном и који обогаћује транскрипте мРНК који су различито експримирани.Циљ нам је био да направимо нова запажања диференцијалне експресије гена код цирозе користећи ССХ у комбинацији са квантитативном ланчаном реакцијом полимеразе реверзне транскриптазе у реалном времену (РТ-ПЦР).Транскриптоми јетре код ХЦВ цирозе, АИХ цирозе, ПБЦ и необолелих ткива јетре су испитивани ССХ.Добијени клонови комплементарне ДНК (цДНК) су поново прегледани за диференцијалну експресију хибридизацијом дот-блот и затим секвенционирани.Експресија одабраног гена је квантификована РТ-ПЦР у реалном времену.Након ССХ, 694 клона су поново прегледана за диференцијалну експресију гена, од којих је 145 секвенционирано и утврђено је да потиче од 89 различитих гена.Седам клонова је било хомологно само са секвенцама експримиране ознаке секвенце (ЕСТ) које кодирају гене који немају познату функцију.Повећана експресија четири гена потврђена је РТ-ПЦР у реалном времену: трансмембрански 4 члан суперфамилије 3 (тетраспанин ЦО-029) у свим облицима цирозе, протеин који интерагује са јежем (ХИП) код АИХ цирозе и хитиназа 3-лике-1 (ХЦ гп-39 или икл-40) и понављање аргинин-глутаминске киселине (РЕРЕ) код ХЦВ цирозе.У свим испитиваним ткивима примећени су полиморфизми гена РЕРЕ и варијанте спајања.Повећана регулација тетраспанина ЦО-029 била је првенствено локализована на ћелије жучних канала.У закључку, нова запажања диференцијалне експресије гена код људске цирозе су направљена коришћењем ССХ као примарног алата за откривање.Нарочито су оправдана даља истраживања гена РЕРЕ и његових производа у болестима јетре повезаних са ХЦВ.