Производи

Моногалактопиранозиди флуоресцеина и флуоресцеин метил естра: синтеза, ензимска хидролиза биотнилованом β-галактозидазом и одређивање коефицијента транслационе дифузије

Флуоресцеин моногликозиди (д-галактопиранозид (ФМГ) и д-глукопиранозид) и њихов метил естар (МФМГ) припремљени су од ацетобромоглукозе/галактозе и флуоресцеин метил естра у добрим приносима.Изведени су експерименти ензимске хидролизе (коришћењем биотиниловане β-галактозидазе) галакто деривата и израчунати кинетички параметри.Током хидролизе примећено је повећање интензитета флуоресценције 15-20 пута.Примећено је линеарно повећање флуоресценције у кратком времену и ниској концентрацији супстрата, што ова једињења чини корисним и осетљивим сондама за галактозидазе.Величина Мицхаелис-Ментен константе (Км) вредности за МФМГ је већа од оне за ФМГ што сугерише могућу конформациону промену флуорогеног супстрата.Вредност Км за биотиниловани β-Гал са ФМГ је нижа од оне за нативни ензим.Ово запажање указује на већи супстратни афинитет биотинилованог ензима у поређењу са природним ензимом.Измерени су коефицијенти транслационе дифузије, за оба флуорогена супстрата и оба производа, применом флуоресцентне корелационе спектроскопије.Измерени су коефицијенти транслационе дифузије за флуорогене супстрате и продукте ензимске хидролизе слични, у опсегу од 3,5–4,5 × 10−10 м2 с−1.Стога побољшање или успоравање ензимске кинетике због разлике у транслационој мобилности супстрата и производа није толико очигледно.