Производи

Мицобацтериум туберцулосис може да опстане деценијама у људском домаћину.Верује се да строги путеви одговора који укључују неоргански полифосфат [поли(П)], који се синтетише и хидролизује полифосфат киназом (ППК) и егзополифосфатазом (ППКС), имају кључну регулаторну улогу у постојаности бактерија.Овде показујемо да је акумулација поли(П) М. туберцулосис временски повезана са ограничењем раста бацила.Такође идентификујемо М. туберцулосис Рв1026 као нову егзополифосфатазу са хидролитичком активношћу против поли(П) дугог ланца.Користећи систем експресије који индукује тетрациклин да би се смањила експресија Рв1026 (ппк2), открили смо да акумулација поли(П) М. туберцулосис доводи до успореног раста и смањене осетљивости на изониазид, повећане отпорности на топлоту и кисели пХ и побољшаног интрацелуларног преживљавања током инфекције макрофага.Трансмисионом електронском микроскопијом, ппк2 кноцкдовн сој је показао повећану дебљину ћелијског зида, што је било повезано са смањеном пермеабилности ћелијског зида за хидрофилне лекове, а не са индукцијом пумпи за ефлукс лека или измењеним формирањем биофилма у односу на контролу празног вектора.Транскриптомска и метаболомска анализа открила је метаболичко померање наниже у нокдауну ппк2 које карактерише смањена транскрипција и транслација и смањење нивоа глицерол-3-фосфата.Укратко, поли(П) игра важну улогу у ограничавању раста М. туберцулосис и метаболичком померању наниже и доприноси толеранцији на антибиотике кроз измењену пермеабилност ћелијског зида. Строги одговор, који укључује регулаторне молекуле неоргански полифосфат [поли(П)] и (п )ппГпп, верује се да посредује у перзистентности Мицобацтериум туберцулосис.У овој студији идентификовали смо нови ензим (Рв1026, ППКС2) одговоран за хидролизу поли(П) дугог ланца.Генетски модификован сој М. туберцулосис са недостатком гена ппк2 показао је повећане нивое поли(П) који су били повезани са раним заустављањем раста бактерија и смањеном осетљивошћу на лек прве линије изониазида, као и повећано преживљавање бактерија током излагања стресу. условима и унутар макрофага.У односу на контролни сој, мутант је показао повећану дебљину ћелијског зида и смањену пермеабилност лека.Глобална експресија гена и анализа метаболита открили су смањену експресију транскрипционих и транслационих машина и промену у коришћењу извора угљеника.Укратко, регулација поли(П) равнотеже је критична за формирање перзистера код М. туберцулосис.