Производи

Слично другим вирусима са позитивним ланцима РНК, томбусвируси се реплицирају комплексом вирусне репликазе везане за мембрану (ВРЦ).ВРЦ се састоји од РНА-зависне РНК полимеразе (РдРп), кодиране п92 вирусом, вирусног п33 РНК шаперона и неколико кооптираних протеина домаћина.Да би постао функционалан РдРп након његовог превођења, протеин репликације п92 треба да се угради у ВРЦ, након чега следи његова активација.Раније смо показали у тесту на бази екстракта квасца без ћелија да је за активацију вируса парадајза (ТБСВ) РдРп потребан растворљив(е) фактор(е) домаћина.У овом чланку идентификујемо ћелијски протеин топлотног шока 70 (Хсп70) као кооптирани фактор домаћина потребан за активацију Н-терминално скраћеног рекомбинантног ТБСВ РдРп.Поред тога, блокирање функције Хсп70 засновано на малим молекулима инхибира синтезу РНК помоћу томбусвируса РдРп ин витро.Штавише, показујемо да неутрални фосфолипиди, наиме, фосфатидилетаноламин (ПЕ) и фосфатидилхолин (ПЦ ), појачавају активацију РдРп ин витро.Насупрот томе, фосфатидилглицерол (ПГ) показује снажан и доминантан инхибиторни ефекат на ин витро активацију РдРп.Такође смо показали да ПЕ и ПЦ стимулишу интеракцију РдРп-вирусне плус-ланчане РНК [(+)РНА], док ПГ инхибира везивање вирусне РНК за РдРп.На основу стимулативних наспрам инхибиторних улога различитих фосфолипида у активацији РдРп томбусвируса, предлажемо да томбусвируси могу користити липидни састав циљаних субћелијских мембрана за регулацију новог ВРЦ склопа током инфекције. РНК-полимераза зависна од вируса кодирана од вируса (РдРп), који је одговоран за синтезу потомства вирусне РНК у инфицираним ћелијама неколико позитивних РНК вируса, у почетку је неактиван.Ова стратегија ће вероватно избећи синтезу вирусне РНК у цитосолу што би брзо довело до индукције ћелијских антивирусних одговора изазваних РНК.Током састављања комплекса репликазе везане за мембрану, вирусни РдРп се активира кроз непотпуно схваћен процес који чини РдРп способним за синтезу РНК.Коришћењем ТБСВ РдРп, показујемо да кооптирани ћелијски Хсп70 шаперон и неутрални фосфолипиди олакшавају активацију РдРп ин витро.Насупрот томе, фосфатидилглицерол (ПГ) има доминантан инхибиторни ефекат на ин витро активацију РдРп и интеракцију РдРп-вирусне РНК, што сугерише да мембрански микродомен који окружује РдРп у великој мери утиче на његову способност за синтезу РНК.Дакле, активација вирусног РдРп вероватно зависи од више компоненти домаћина у инфицираним ћелијама.