Производи

Нови тест течне хроматографије високих перформанси за гликозилтрансферазе заснован на дериватизацији антранилном киселином и детекцији флуоресценције.

Тестови су развијени коришћењем јединствене хемије обележавања 2-аминобензојеве киселине (2АА; антранилна киселина, АА) за мерење активности и β1-4 галактозилтрансферазе (ГалТ-1) и α2-6 сијалилтрансферазе (СТ-6) помоћу течности високих перформанси хроматографија (ХПЛЦ) са детекцијом флуоресценције (Анумула КР. 2006. Напредак у методама дериватизације флуоресценције за течну хроматографску анализу гликопротеинских угљених хидрата високих перформанси. Анал Биоцхем. 350:1-23).Н-ацетилглукозамин (ГлцНАц) и Н-ацетиллактозамин су коришћени као акцептори, а уридин дифосфат (УДП)-галактоза и цитидин монофосфат (ЦМП)-Н-ацетилнеураминска киселина (НАНА) као донори за ГалТ-1 и СТ-6, респективно.Ензимски производи су обележени ин ситу са АА и одвојени од супстрата на ТСКгел Амид 80 колони коришћењем услова нормалне фазе.Ензимске јединице су одређене из области пикова поређењем са истовремено дериватизованим стандардима Гал-β1-4ГлцНАц и НАНА-α2-6 Гал-β1-4ГлцНАц.Утврђени су линеарност (време и концентрација ензима), прецизност (интра- и интересеј) и репродуктивност за тестове.Утврђено је да су тестови корисни у праћењу активности ензима током изолације и пречишћавања.Тестови су били веома осетљиви и били су једнаки или бољи од традиционалних мерења на бази радиоактивног шећера.Формат теста се такође може користити за мерење активности других трансфераза, под условом да акцептори угљених хидрата садрже редукциони крај за обележавање.Тест за акцепторе гликопротеина је развијен коришћењем ИгГ.Развијена је кратка метода ХПЛЦ профилисања за одвајање ИгГ гликана (бинтенарни Г0, Г1, Г2, моно- и дисијалировани), што је омогућило брзо одређивање активности ГалТ-1 и СТ-6.Штавише, овај метод профилисања би требало да се покаже корисним за праћење промена ИгГ гликана у клиничким условима.