Производи

Топологија мембране домена канала колицин Е1 проучавана је преносом енергије флуоресцентне резонанце (ФРЕТ).ФРЕТ је укључивао генетски кодирану флуоресцентну амино киселину (кумарин) као донора и селективно обележен цистеински остатак везан са ДАБМИ (4-(диметиламино)фенилазофенил-4'-малеимид) као ФРЕТ акцептором.Флуоресцентни кумарински остатак је уграђен у протеин преко ортогоналног пара тРНА/аминоацил-тРНА синтетазе који је омогућио селективну инкорпорацију у било које место унутар домена колицин канала.Свака варијанта је садржавала стоп (ТАГ) мутацију за уградњу кумарина и мутацију цистеина (ТГТ) за везивање ДАБМИ.Шест међухеличких растојања унутар спирала 1-6 је одређено коришћењем ФРЕТ анализе и за растворљиво и за мембрански везано стање.ФРЕТ подаци су показали велике промене у међухеликалним растојањима између спирала 3-6 након повезивања мембране дајући нови увид у структуру домена канала везану за мембрану.Уопштено говорећи, интерхеличка ефикасност кумарина-ДАБМИ ФРЕТ смањена је након везивања за мембрану, надовезујући се на кровни модел за колицин канал.Развијен је пробни модел за затворено стање домена канала на основу тренутних и претходно објављених ФРЕТ података.Модел сугерише кружни распоред спирала 1-7 у смеру казаљке на сату са ванћелијске стране и мембранске међуфазне везе хеликса 1, 6, 7 и 10 око централне трансмембранске укоснице формиране спиралама 8 и 9.