Производи

ОРФ45 протеин Капосијевог херпесвируса повезаног са саркомом (КСХВ) је протеин непосредног раног тегумента специфичан за гамахерпесвирус.Наше претходне студије су откриле његове кључне улоге у раним и касним стадијумима КСХВ инфекције.У овој студији смо испитали интерактом ОРФ45 користећи панел моноклонских антитела.Поред претходно идентификованих екстрацелуларно регулисаних протеина киназе (ЕРК) и п90 рибосомалне С6 киназе (РСК), пронашли смо неколико других копречишћених протеина, укључујући истакнуте од ∼38 кДа и ∼130 кДа.Масена спектрометрија је открила да је протеин од 38 кДа вирусни ОРФ33, а протеин од 130 кДа је ћелијски УСП7 (убиквитин-специфична протеаза 7).Пресликали смо домен који се везује за ОРФ33 на високо очуваних 19 аминокиселина на карбоксилном терминалу (аа) ОРФ45 и УСП7-везујући домен на пријављени консензусни мотив у централном региону ОРФ45.Користећи имунофлуоресцентно бојење, приметили смо колокализацију ОРФ45 са ОРФ33 или УСП7 и под трансфицираним условима и у ћелијама инфицираним КСХВ.Штавише, приметили смо ОРФ45 зависну релокализацију дела ОРФ33/УСП7 из језгра у цитоплазму.Открили смо да је ОРФ45 изазвао повећање акумулације протеина ОРФ33 које је укинуто ако је обрисан или ОРФ33- или УСП7-везујући домен у ОРФ45.Штавише, брисање конзервираног карбоксилног краја ОРФ45 у КСХВ геному драстично је смањило ниво протеина ОРФ33 у ћелијама инфицираним КСХВ и укинуло производњу вириона потомака.Колективно, наши резултати не само да откривају нове компоненте ОРФ45 интерактома, већ такође показују да су интеракције између ових протеина кључне за литичку репликацију КСХВ. Капосијев херпесвирус повезан са саркомом (КСХВ) је узрочник неколико карцинома код људи.КСХВ ОРФ45 је мултифункционални протеин који је неопходан за КСХВ литичку репликацију, али тачни механизми помоћу којих ОРФ45 обавља своје критичне функције су нејасни.Наше претходне студије су откриле да сав протеин ОРФ45 у ћелијама постоји у комплексима високе молекуларне тежине.Стога смо настојали да окарактеришемо интерактом ОРФ45 како бисмо пружили увид у његове улоге током литичке репликације.Користећи панел моноклонских антитела, испитали смо ОРФ45 интерактом у ћелијама инфицираним КСХВ.Идентификовали смо два нова везујућа партнера ОРФ45: вирусни протеин ОРФ33 и ћелијску убиквитин-специфичну протеазу 7 (УСП7).Даље показујемо да је интеракција између ОРФ45 и ОРФ33 кључна за ефикасну производњу КСХВ вирусних честица, што сугерише да циљана интерференција са овом интеракцијом може представљати нову стратегију за инхибицију литичке репликације КСХВ.